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血液科医生常说的“流式”,你知道是什么吗?

2018-08-27 06:36 | 来源:未知 | 责任编辑:本站编辑

‍‍‍来源:“华西检验医学中心”微信公众号‍‍

作者:曾婷婷‍‍‍‍


临床常说的“流式”是流式细胞术(flow cytometry)的简称,因其检测在液体中移动的细胞或粒子而得名。具体来说,单个细胞悬液中加入一个或多个荧光标记的抗体,抗体通过抗原抗体反应与细胞上的抗原结合。在流式细胞仪中,细胞在鞘液中单个流动,就像红细胞单个通过毛细血管一样通过检测口,仪器发出一个或多个激光束激发标记在细胞上的荧光物质。从荧光物质发出的光被收集、分离、检测,其数据被传输到控制流式细胞仪的计算机供分析。


流式的临床应用


在临床上,流式细胞术被用于精确检测异常细胞群,如对血液系统肿瘤进行诊断和分型,或在HIV感染时检测CD4+T淋巴细胞。流式细胞术也可用于检测生理过程,例如移植前干细胞计数(CD34阳性细胞计数)或组织相容性测试。


流式为什么能够检测疾病?


在正常细胞分化成熟过程中,不同的抗原会在其表面或内部出现或消失,通过检测这些抗原的存在或缺失,我们能够确定细胞的种类和发育阶段。这些在白细胞表面的抗原,又称为白细胞分化抗原或簇分化抗原 (cluster of differentiation, CD)。疾病情况下,例如白血病时,本来数量很少或本不应该出现的原始细胞,大量出现在骨髓或外周血中,通过检测这些细胞CD分子表达情况,可以准确知道这些细胞的类型,以便进行诊断和治疗。临床常用的CD分子见下表。

(Biomedical Uses of Flow Cytometry.  James L. Weaver and Maryalice Stetler-Stevenson From: Molecular Biomethods Handbook, 2nd Edition. Edited by: J. M. Walker and R. Rapley © Humana Press, Totowa, NJ 1039)


流式的优点是什么?


流式最大的优点就是特异性和敏感性都很好,并且检测起来速度很快。


WHO血液系统肿瘤的分类基于:形态学(morphology)、免疫表型(immunophenotype)、遗传学异常(genetic abnormalities)和临床特征(clinical features)的。


一些造血系统肿瘤具有特异性的免疫表型,在缺乏免疫表型检测的情况下诊断非常困难。因此怀疑血液系统恶性肿瘤的标本应该通过流式细胞术或免疫组织化学检测免疫表型。与免疫组化检测相比,流式具有更高的灵敏度,主观性更低,也更快速,在几个小时内就能够对白血病进行分型。在评估血液系统疾病是否能够使用单克隆抗体治疗或其治疗效果时,流式也具有明显的优势,因为单抗的靶抗原必须在细胞表面表达,才能治疗有效。


流式的标本要求


液体标本是流式细胞仪的理想标本类型,外周血和骨髓标本是最常见的,使用枸橼酸钠和EDTA抗凝均可,即使用绿头或紫头抗凝管采集流式标本。胸水、腹水、脑脊液也是很常见的标本类型,因为这些标本中细胞数量可能比较少,送检标本量要尽可能的多一些。当然,能够获得单细胞悬液的固体组织也是可以进行检测的。流式检测的是细胞表面的抗原,标本新鲜很重要,最好在24h内送检,室温保存即可。


需要注意的是,慢性粒单核细胞白血病(Chronic myelomonocytic leukemia, CMML)  和阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH) 检测一定要使用外周血标本,而想要诊断骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS),最好使用骨髓标本。


流式检测在血液病中起什么作用?


血液病患者的整个病程中需要多次进行流式检测:初诊时需要流式帮助确诊和分型,病程中需要流式监测治疗效果,骨髓移植时需要流式对供者细胞进行CD34阳性细胞进行准确计数,化疗或者骨髓移植完全缓解后需要流式进行微小残留病变(minimal residual disease, MRD)的检测。同时,流式还可以通过抗原表达模式的不同进行疾病诊断。


如下图左为正常骨髓下阶段粒细胞的CD13/CD16表达模式,而右图则是MDS患者下阶段粒细胞的CD13/CD16表达模式。


一篇发表在2015年《BLOOD》杂志上的文章发现,外周血中CD14+CD16-单核细胞在单核细胞群中比例超过94%时,诊断CMML的敏感性和特异性都在90%以上。其模式如下,左图为CMML,右图为反应性单核细胞增多。

(Characteristic repartition of monocyte subsets as a diagnostic signature of chronic myelomonocytic leukemia. Blood. 2015; 125 (23): 3618- 3626)


流式报告是怎么样的?


流式报告的形式可以是散点图、直方图,也可以是数值的。我们会在散点图中用不同颜色标注出异常细胞和标本中残留的正常细胞(通常是淋巴细胞,作为内对照),描述异常细胞的比例及表达的抗原,最后给出结论及建议。下面分别为白血病和PNH的流式报告,我们分别使用了散点图和直方图进行报告。


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